Физиологические аспекты локальной иммунорегуляции при лечении хронической урогенитальной хламидийной инфекции у мужчин

Воронцов Тимофей Николаевич
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Курган – 2007


ОБЩАЯ ХАРКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Анализ проблем сохранения репродуктивного здоровья мужчин показывает, что хроническими уретритами и простатитами на сегодняшний день страдают от 30 до 64% мужчин в возрасте от 18 до 63 лет (Ткачук В.И., 1999; Зиганшин О.Р., 2002; McCann S.M. el al., 2003). Исследуемая нами статистика свидетельствует о том, что данными воспалительными заболеваниями репродуктивного тракта чаще болеют мужчины молодого возраста, при этом болезнь приобретает у них затяжной характер и способствует нарушению репродуктивной функции, снижению трудоспособности (Мавров И.И., 1994). Как показала практика, использование антибактериальных препаратов при воспалительных заболеваниях половой системы мужчин во многих случаях оказывается малоэффективным и не ведет к нормализации естественного течения иммунного ответа организма на урогенитальную инфекцию (Козлова В.И., Пухнер А.Ф., 1997).
Вот уже более десяти лет при оценке иммунного статуса, наряду с исследованием субпопуляций лимфоцитов, изучением макрофагов и нейтрофилов, большое внимание уделяется цитокиновой регуляции деятельно¬сти иммунной системы. Как сообщают ряд авторов (Кетлинский С.А., 1993; Симбирцев А.С., 1998; Ярилин А.А., 1999; Хаитов P.M. с соавт., 2000) среди цитокинов важнейшими являются интерлейкин-1 (ИЛ-1) и интерлейкин-2 (ИЛ-2). Так, ИЛ-1 служит одним из главных медиаторов местной воспалительной реакции и системного острофазового ответа, он стимулирует комплекс защитных реакций организма. Кроме того, ИЛ-1 активирует нейроэндокринную систему, стимулирует костномозговое кроветворение, усиливает репаративные процессы (Симбирцев А.С., 1998; Dinarello С.A. et. al., 1989; Platanias L.C. et. al., 1990). Цитокин ИЛ-2 является мощным активатором лимфоцитов и фагоцитов (Del Prete G. et. al., 1994). Стимулируя, главным образом, Т-хелперы (Th) первого типа он усиливает, тем самым, антимикробную и противоопухолевую резистентность (Симбирцев А.С., 1998; Ярилин А.А., 1999; Thomson A., 1992; Igietseme J. et al., 1997). На основе рекомбинантного ИЛ-1 создан отечественный препарат «беталейкин», который разрешен к клиническому применению приказом Минздрава РФ №51 от 18.02.1997г. в качестве иммуностимулятора и также рекомендуется как средство для восста¬новления костномозгового кроветворения у больных раком после курсов химио- и радиотерапии (регистрационный номер 97/51/6). На базе ИЛ-2 создан препарат «ронколейкин», который применяют для лечения септических состояний различной этиологии, сопровождающихся иммуносупрессией (приказ Минздрава РФ №249 от 31.08.1995г., регистрационный номер 95/249/5). Как показано Ковалевым Ю.Н. с соавт. (1996), Долгушиным И.И. с соавт. (2001), Зиганшиным О.Р. с соавт. (2001), эти препараты позволяют использовать уникальные свойства ИЛ-1 и ИЛ-2 в клинической практике для ускорения репаративных процессов поврежденной ткани и повышения антимикробной резистентности. Но насколько данные сведения полно и всесторонне отражают природу восстановления утраченных функций при защите репродуктивного тракта? В чем, в каких процессах, механизмах, явлениях проявляется локальная урогенитальная картина иммунологической эффективности цитокинов в лечении мужчин от генитальных инфекций различной этиологии? В поиске ответов на эти вопросы, нами было определено, что вскрытие физиологических аспектов локальной иммунорегуляции при иммунокоррегирующей и цитокиновой терапии хронической урогенитальной инфекции у мужчин своевременно и актуально. Далее были сформулированы:
цель исследования – выявить картину изменений иммунологических функций и местных механизмов антимикробной защиты урогенитального тракта больных с хроническими уретритами и простатитами хламидийной этиологии и описать физиологические аспекты регуляции иммунного ответа репродуктивного тракта мужчин в свете сравнительной характеристики клинической эффективности применения беталейкина и ронколейкина относительно имунофана.
Задачи исследования:
1. Определить картину хронических воспалительных заболеваний урогенитального тракта мужчин на примере уретритов и простатитов.
2. Установить типичные изменения эякулята у больных с хроническими воспалительными заболеваниями гениталий, на основании чего оценить направление и выраженность иммунологических сдвигов, степень влияния на местный иммунитет этиологии инфекционного и распространенности воспалительного процессов.
3. Описать физиологические аспекты локальной иммунорегуляции при иммунокоррегирующих терапевтических воздействиях (на примере имунофана) и лечении цитокинами (на примере ронколейкина и беталейкина).
4. Исследуя влияние имунофана, ронколейкина и беталейкина на состояние местного иммунитета у обследуемых больных с
хроническими заболеваниями мочеполовой системы, дать сравнительную  иммунологическую оценку клинической эффективности применения этих препаратов в лечении мужчин с хронической генитальной хламидийной инфекцией.
Для выполнения задач, стоящих в данной работе, была определена база исследований: лаборатория профильных иммунологических исследований Южно-Уральской научной школы помехоустойчивости биосистем при Южно-Уральском государственном университете (г.Челябинск), Областной кожно-венерологический диспансер (г.Челябинск), кафедра кожно-венерологических болезней Челябинской государственной медицинской академии.
Научная новизна. Настоящая работа инновационно представляет физиологическую картину иммунологической эффективности цитокинов в лечении мужчин с хронической генитальной хламидийной инфекцией. Так:
1. Экспериментально показано, что после лечения беталейкином или ронколейкином у больных с воспалительными заболеваниями половой системы в эякуляте относительно контроля (группы леченных имунофаном) существеннее снижалось общее количество, число жизнеспособных лейкоцитов и относительное содержание мононуклеаров, лизосомальная активность, спонтанная и индуцированная НСТ-редуцирующая активность нейтрофилов, ярче нарастал функциональный резерв этих клеток, увеличивалась активность и интенсивность фагоцитоза, снижалось количество нейтрофилов, адгезированных на сперматозоидах, число лимфоцитов, несущих CD маркеры, уве¬личивалась концентрация С3 и С1-инг компонентов комплемента при снижении С4,  нарастал уровень ИЛ-1a и ИЛ-1b, при снижении концентрации ИЛ-8 и ФНО-a, уменьшался общий белок, отмечалась тенденция к снижению иммуноглобулинов (Ig): IgA, IgM, IgG и лизоцима, увеличению sIgA.
2. Доказано, что беталейкин способствовал более яркому и достоверно значимому, относительно динамики группы контроля и группы, леченных ронколейкином, нарастанию количества лейкоцитов и лимфоцитов, снижению абсолютного и относительного количества моноцитов, нейтрофилов, увеличению активности, интенсивности фагоцитоза и функционального резерва нейтрофилов, роста относительного содержания Т-лимфоцитов периферической крови, экспрессирующих поверхностные маркеры CD3+, CD4+, CD16+.
Теоретическая значимость работы заключается в том, что настоящее исследование существенно расширило физиологические представления о природе и роли «местного иммунитета», а с ним о физиологических аспектах локальной иммунорегуляции в лечении мужчин цитокинами от хронической хламидийной инфекции. Семантически определена проблема идентификации характера системных иммунологических нарушений в локальных механизмах антимикробной защиты как в патогенезе воспалительных заболеваний половой системы у мужчин, так и в иммунокоррекции репродуктивного тракта мужчин при лечении их от урогенитальных инфекций. Актуализируется поиск взаимосвязей состояния иммунной системы организма в целом с характером и глубиной локального иммунодефицита в развитии хронических воспалительных заболеваний на примере уретритов и простатитов у мужчин.
Практическая значимость работы сводится к научно-экспериментальному доказательству того, что терапия беталейкином способствует наиболее быстрому и эффективному, относительно имунофана и даже ронколейкина, клиническому выздоровлению пациентов, леченых от инфекций, передаваемых половым путем. Полученные научно-экспериментальным путем выводы настоящей работы свидетельствуют о том, что эффективность клинического и этиологического выздоровления пациентов с хроническими воспалительными заболеваниями половой системы зависит от варианта используемой терапии. В случае назначения предложенного в работе комплексного варианта лечения с использованием имунофана, исследуемая эффективность составляла от 67,6% до 84,1%. При включении в комплекс лечения ронколейкина, эффективность терапии повышалась и достигала уровня 93,2% случаев выздоровления. Самый высокий удельный вес излеченности от 97,5% до 100% был у пациентов, получивших комбинированную терапию с использованием беталейкина. Другими словами, разработанный и апробированный нами комплекс патогенетической терапии заболеваний мочеполовой системы у мужчин включил этиотропное лечение и применение иммунотропных препаратов (цитокинов). Использование определенных в работе клинико-иммунологических критериев диагностики, соблюдение установленных в ходе исследования сроков диспансерного наблюдения больных, а также то, что выявленная автономность локального иммунно-регуляторного комплекса мужчин допускает возможность оценки противоинфекционной резистентности урогенитального тракта путем изучения факторов секретов гениталий,  составили основу практической значимости настоящей работы.

Положения, выносимые на защиту

1. У пациентов, получавших терапию беталейкином, относительно контрольных значений и лиц, леченных ронколейкином регистрируются более значимые изменения, которые заключались в снижении общего количества лейкоцитов, числа жизнеспособных лейкоцитов и мононуклеаров в эякуляте, увеличении доли нейтрофилов, снижении активности лизосом нейтрофилов, возрастании функционального резерва нейтрофилов, увеличении активности и интенсивности фагоцитоза нейтрофилов эякулята, снижении уровня IgA, IgG и лизоцима в эякуляте.
2. Применение рекомбинантных ИЛ-1 и ИЛ-2 относительно имунофана намного эффективнее усиливает защитные реакции в очаге поражения за счет активации функций нейтрофильных гранулоцитов и усиления синтеза провоспалительных цитокинов клетками воспалительного очага. Наиболее яркий и достоверный эффект применения цитокинов манифестирует беталейкин, в связи с чем, использование ИЛ-1 максимально повышает эффективность лечения цитокинами от хронической хламидийной инфекции.
Внедрение результатов работы:
- функциональных критериев диагностики локального иммунодефицита при развитии хронических воспалительных заболеваний урогенитального тракта мужчин (на примере хронических уретритов и простатитов);
- метода лечения мужчин от воспалительных заболеваний гениталий с использованием беталейкина и ронколейкина проходило на базе Челябинского областного кожно-венерологического диспансера, а также городской клинической больницы №3 (г.Челябинск) и ЦМСЧ-15 Федерального медико-биологического агентства Минздравсоцразвития РФ г.Снежинска Челябинской области, что закреплено в четырех актах и отражено в приложении к настоящей работе. Результаты настоящего исследования также используются в педагогическом процессе на кафедре основ медицинских знаний Южно-Уральского государственного университета г.Челябинска и кафедре кожно-венерологических болезней Челябинской государственной медицинской академии, что также имеет свое отражение в приложении и закреплено двумя актами внедрения.
Апробация работы. Основные положения работы были доложены на научно-практической сессии «Актуальные проблемы медицинской науки и профессионального образования» (Челябинск, 2000), научно-практических конференциях «Современные лабораторные технологии в биологии и медицине» (Челябинск, 2000), «Хламидийная и вирусная инфекции, перспективы лечения в ХХI веке» (Новосибирск, 2000), научной конференции, посвященной 90-летию кафедры кожных и венерических болезней лечебного факультета Российского государственного медицинского университета «Хронические дерматозы: новые аспекты патогенеза и терапии» (Москва, 2001), на страницах журналов центральной научной печати: «Иммунология» и «Российский журнал венерологии и дерматологии» (Москва, 2000, 2001).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 17 работ, из которых 1 монография, 2 учебных пособия, 2 методических рекомендаций, 3 публикации в центральной научной печати.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 192 страницах машинописного текста и состоит из оглавления, списка условных сокращений, введения, четырех глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложения. Список литературы включает в себя 270 работ, где 175 работ отечественных и 95 работ иностранных авторов, среди которых 82 – на иностранном языке. Работа иллюстрирована 25 таблицами и 3 рисунками по тексту. В приложении содержится 7 актов внедрения результатов научных исследований.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В констатирующей части исследования были организованы и проведены обследования 159 человек, среди которых больные хроническим хламидийным уретритом (n=77), простатитом (n=82) и 57 здоровых доноров. Возраст обследованных мужчин колебался от 20 до 58 лет, составив в среднем 27,6±0,4 года. В формирующей части работы в 1-ую (контрольную) группу (n=44) вошли респонденты, в основе лечения которых лежало применение имунофана обладающего иммунорегулирующим и детоксикационным действием. Состав 1-ой группы выглядел следующим образом: больные хроническим хламидийным уретритом (n=26) и простатитом (n=18). Экспериментальными группами являлись 2-я и 3-я группы. Во 2-ой группе (n=44) основу лечения составляло применение ронколейкина. В 3-ей (n=40) – беталейкина. Состав 2-ой группы выглядел так: больные хроническим хламидийным уретритом (n=25) и простатитом (n=19); 3-ей группы – так: больные хроническим хламидийным уретритом (n=23) и простатитом (n=17). Методика лечения больных 2-ой и 3-ей групп основывалась на наших методах (Воронцов Т.Н. с соавт., 2003, 2004) подробно описанных ниже.
У всех больных имелись воспалительные заболевания мужских половых органов, которые относились к соответствующей группе урологических заболеваний по Международной классификации болезней Десятого пересмотра. Диагнозы заболеваний были выставлены на основании клинических, лабораторных, инструментальных и других, необходимых для этого, официальных методов исследования. Всем больным проводилось общеклиническое обследование. В процессе урологического обследования проводилась тотальная уретроскопия. Секрет предстательной железы получали путем массажа. Бактериологическое исследование полученного экспримата предстательной железы осуществлялось по тем же принципам, что и уретрального содержимого. Все больные подвергались серологическому обследованию на ВИЧ-инфекцию и сифилис.
Микробиологическое обследование соответствовало общепринятым методикам, а также рекомендациям в современной научно-методической литературе (Акышбаева К.С. с соавт., 1989; Белобородова Н.В., 1998; Бургасов П.Н. с соавт., 2006). Иммунологическое обследование пациентов проводили в динамике: до лечения, при проведении первого контроля завершенности терапии и через один месяц после окончания курса терапии. Для оценки антимикробной защиты репродуктивного тракта мужчин материалом для исследования был выбран эякулят, поскольку на величину его показателей очаг воспаления любой другой локализации, имеющийся в организме, оказывает наименьшее влияние. Для оценки системного иммунитета использовали венозную кровь.
В данных биологических жидкостях определяли количество, соотношение и жизнеспособность лейкоцитов (Дзержинская И.И., 1988; Соколов Е.И., 1998). С помощью иммерсионной микроскопии учитывали активность фагоцитоза (АФ) - процент нейтрофилов, захвативших хотя бы одну частицу латекса, и интенсивность фагоцитоза (ИФ) - число поглощенных микросфер латекса в 100 подсчитанных нейтрофилах (Караулов А.В., 1999). Подсчет лизосом в нейтрофилах проводили в «крестах» (Фрейдлин И.С., 1986).
Исследование внутриклеточного кислородзависимого метаболизма проводили, используя НСТ-тест (Park B.N. et al., 1998). Постановку метода осуществляли в модификации Маянского Д.Н. (1991). Определение активности (СН50) и компонентов комплемента: С1 ингибитора, С3, С4 в семенной жидкости и периферической крови тоже шло по широко известным и описанным в специальной литературе методикам (Кейт Л.Г. с соавт., 1988).
Лизоцим в семенной жидкости определяли нефелометрическим методом по Бухарину О.В. с соавт. (1994). Концентрацию иммуноглобулинов в эякуляте определяли методом радиальной иммунодиффузии в геле по Mancini G. et al. (1975). Определение секреторного IgA в семенной жидкости производилось методом радиальной иммунодиффузии по Manhini G. et al. (1980) с использованием моноспецифической сыворотки против иммуноглобулина человека производства предприятия биологических и медицинских препаратов «БИОМЕД» им. И.И. Мечникова, г.Москва.
При определении цитокинов: ИЛ-1a, ИЛ-lb, ИЛ-8, ФНО-a в эякуляте и периферической крови были использованы соответствующие тест-системы для иммуноферментного анализа, произведенные ООО «Цитокин» (г.Санкт-Петербург). CD-типирование лимфоцитов, выделенных из эякулята проводили с помощью методики непрямой иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител (МКА) (НПК «Препарат», г.Н.Новгород) к дифференцировочным антигенам лимфоцитов CD3, CD4, CD8, CD16, CD22, CD25, CD95. Исследование лимфоцитов периферической крови проводилось по методике иммунофенотипирования лимфоцитов в модификации Сибиряка С.В. с соавт. (1999) с использованием моноклональных антител серии ИКО (НТЦ Медиоспектр», г.Москва): анти-CD4, анти-CD8, анти-СD16, анти-СD19. Концентрацию иммуноглобулинов классов А, М и G в сыворотке крови определяли как по общепринятой методике (Mancini G. et al., 1975), так и в модификации Тихомирова А.А. (1987).
Все полученные результаты исследований (М±m) были обработаны общепринятыми методами вариационной статистики. О достоверности различий показателей сравниваемых групп судили по критерию Стьюдента (t). Для оценки достоверности различий при множественном сравнении использовали поправку Бонферрони. Использовали непараметрические критерии: точный критерий Фишера (ТКF) (применялся только односторонний его вариант), критерий Крускала-Уоллиса. Различия считали значимыми только при р<0,05 (Гублер Е.В., 1978; Гланц С., 1999). Статистическая обработка материала проводилась с использованием пакета прикладных программ «Statistica for Windows 5.0». Результаты исследований выражали в соответствии требованиям Международной системы единиц.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследования структурно-функциональных компонентов и факторов местного иммунитета у больных хроническим хламидийным уретритом и хроническим простатитом с помощью анализа клеток их эякулята в сравнении с показателями здоровых респондентов было установлено, что типичными изменениями у больных респондентов были: увеличение в эякуляте числа лейкоцитов, относительного содержания мононуклеаров, лизосомальной активности и числа нейтрофилов, спонтанно восстанавливающих НСТ, снижение функционального резерва нейтрофилов в НСТ-тесте и фагоцитарной активности нейтрофилов; появление клеток с CD маркерами 3, 4, 8, 16, 20, 25, 95; уменьшение количества С3 компонента комплемента, ИЛ-la и ИЛ-1b; увеличение содержания общего белка, лизоцима, С4 компонента комплемента, ИЛ-8, ФНО-a, иммуноглобулинов всех классов. Мы неоднократно констатировали, что секреты слизистых репродуктивного тракта мужчин содержат различные клетки и растворимые факторы, играющие важную роль в функционировании локального иммунного комплекса. Это обеспечивается достаточным спектром иммунных факторов, которые представляют собой не просто форпост системного иммунитета, а уникальную в своей комплексности и организации иммунологическую среду со своими количественными и качественными характеристиками. Более того, к отмеченным выше клеточным факторам есть все основания отнести и нейтрофилы. Установленный в ходе обследования высокий удельный вес их жизнеспособности доказывает защитную роль этих клеток. Из гуморальных факторов нами обнаружены не только лизоцим, иммуноглобулины, медиаторы воспаления, но и компоненты комплемента, цитокины. Все перечисленные факторы являются не только элементами «первой» линии защиты репродуктивного тракта, но и принимают участие в межклеточном взаимодействии и в локальном иммунном ответе. Таким образом, можно утверждать, что наличие инфекций, передаваемых половым путем в репродуктивном тракте мужчин, сопровождается дисфункцией «местного иммунитета». При этом наблюдаются нарушения в системе клеточного и гуморального иммунитета, что диктует необхо¬димость включения в комплексную терапию, наряду с антибиотиками, иммунокорректоров.
Суть традиционной схемы лечения была следующей: все пациенты получали лечение по общепринятым схемам, включающим антибиотикотерапию – препарат авелокс (моксифлоксацин), который назначали в дозе 400 мг один раз в сутки при ХХУ – 10 дней, ХХП – 15 дней, имунофан, физиолечение (интрамаг, андрогин) по рекомендациям завода изготовителя, ферментотерапию (лонгидаза 3000 МЕ внутримышечно раз в три дня, всего 5 инъекций), сосудистые препараты (детралекс по 1 табл. два раза в день – 10 дней), массажи предстательной железы, местное лечение (инстилляции в уретру: мирамистин, проторгол).
В формирующей части исследования, нами было предложено в экспериментальных группах для лечения пациентов с воспалительными заболеваниями половой системы применение ронколейкина и беталейкина в сочетании с антибактериальной терапией. Беталейкин вводился в виде 5 подкожных инъекций в дозе 5 нг/кг массы тела на 1,0 мл изотонического раствора с интервалом 2 дня. Препарат начинали использовать одновременно с антибиотикотерапией. Ронколейкин использовали в виде подкожных введений 0,5 мг через день в сочетании с этиотропной терапией. Всего больные получали 5 инъекций через день. Критериями эффективности терапии во всех трех группах наблюдения служили: клиническое выздоровление больных, нормализация клинических анализов и элиминация возбудителей из половых путей. Сопоставление жалоб респондентов контрольной и экспериментальных групп до начала лечения и после его окончания (в среднем на 21-28 дни лечения) вскрыло ряд проблем переносимости и клинической эффективности применяемого нами способа лечения относительно контроля.
Согласно общих клинических наблюдений за группами сравнения, после введения ронколейкина у 12 (19,67%) пролеченных больных повышалась температура тела до субфебрильных цифр. У 1 (1,64%) пациента температурная реакция достигала 37,3°С. Остальные пациенты не отмечали пирогенного эффекта. После введения беталейкина у 16 (27,58%) пациентов повышалась температура тела. Пирогенный эффект был выраженным у 2 (3,44%) больных и достигал 38,2°С, длился в течение одного часа, проходил либо самостоятельно, либо после введения нестероидных противовоспалительных препаратов. У представителей контрольной группы, после введения имунофана побочных действий во время и после введения препарата не было. Динамика жалоб у больных воспалительными заболеваниями половой системы, до и после лечения имунофаном, ронколейкином и беталейкином показала, что до лечения частота и порядок (набор) жалоб у больных в контрольной группе и в группах сравнения были примерно одинаковыми. После лечения ронколейкином и беталейкином достоверно реже сохранялись жалобы у респондентов 2-ой и 3-ей групп по сравнению с группой больных получавших терапию имунофаном. В целом, после проведения цитокиновой терапии намного улучшалось самочувствие больных, было больше пациентов, у которых после лечения отсутствовали какие-либо жалобы.
Динамика характера выделений из мочеиспускательного канала оценивалась в те же сроки, что и динамика жалоб. Чаще всего у обследованных нами больных, выделения носили слизистый характер. К концу лечения у респондентов, леченных ронколейкином или беталейкином, отсутствовали выделения из уретры у 37 (94,9%) и 35 (94,6%) человек соответственно, в то время как после лечения имунофаном выделения исчезали у 25 (67,6%) пациентов.
Полное отсутствие выделений достоверно отмечено как минимум у 27% большего числа больных, леченных ронколейкином или беталейкином, по сравнению с пациентами, в терапии которых использовали имунофан. Сохраняющиеся у 2 (5,4%) больных, леченных беталейкином, выделения имели не воспалительный характер, были прозрачными на вид, что давало основание трактовать их как реакцию на проведенное местное лечение. То же можно сказать и об 1 (3,6%) респонденте группы, леченых ронколейкином. В группе леченных имунофаном таких больных после лечения было 8 (21,6%) человек. Слизисто-гнойный характер выделений из уретры определялся у 4 (10,8%) больных, леченных имунофаном, и 1 (2,6%) респондента группы, леченных ронколейкином.
Более яркая динамика уменьшения случаев клинических проявлений воспалительного процесса в области наружного отверстия уретры прослеживалась у больных после использования беталейкина. У них полностью исчезала гиперемия, отечность и слипание губок уретры. У больных, получавших терапию ронколейкином, наблюдалось отсутствие клинических проявлений заболева¬ния в 95,1% случаев. Эффективность клинического и этиологического выздоровления обследованных нами пациентов зависела от варианта используемой терапии (табл. 1). В случае назначения терапии с применением имунофана она варьировала от 67,6% до 84,1%.

Таблица 1. Эффективность терапии обследованных больных с различными заболеваниями половой системы

При включении в комплекс лечения ронколейкина эффективность терапии повышалась до 93,2% случаев излеченности. Самым высоким удельный вес излеченности был у пациентов, получивших комбинированную терапию с использованием беталейкина. В данном случае он варьировала от 94,6% до 97,5%. А при анализе динамики проявлений воспалительного процесса в области наружного отверстия мочеиспускательного канала до и после лечения эффективность терапии в группе леченных беталейкином составила 100%.
Сравнивая показатели «местного иммунитета» до и после лечения у представителей групп, леченных имунофаном и цитокинами, было отмечено, что как в контрольной, так и в экспериментальных группах общее содержание лейкоцитов в эякуляте у больных хроническим хламидийным уретритом до лечения было повышенным, при простатите значительно повышенным. После лечения у всех пациентов, получавших терапию ронколейкином и беталейкином, происходило достоверное уменьшение количества лейкоцитов как в своих группах (р<0,05), так и по сравнению с результатами больных, леченных имунофаном (р<,05). Оценивая показатели функциональной активности нейтрофилов в эякуляте у больных после лечения, видно, что терапия имунофаном, ронколейкином и беталейкином достоверно стимулирует фагоцитоз, увеличивает функциональный резерв нейтрофилов за счет снижения спонтанной НСТ-реакции, уменьшает их лизосомальную активность. Существенное усиление фагоцитоза нейтрофилов под влиянием цитокинов является важным и достоверным (р<0,05) моментом для максимального очищения воспалительного очага от инфекции у представителей экспериментальных групп.
В экспериментальных группах у больных хроническим хламидийным простатитом и уретритом СD4+ -лимфоциты после терапии этими препаратами отсутствовали (р<0,05). После лечения имунофаном достоверное снижение числа этих лимфоцитов происходило только у пациентов с уретритом. Нами не было обнаружено достоверного влияния имунофана на количество и динамику СD8+-лимфоцитов у больных хроническим хламидийным простатитом. В итоге лечения имунофаном и цитокинами происходило достоверное изменение иммунорегуляторного индекса (CD4/CD8) и содержания СD16+-лимфоцитов у всех пациентов с хроническим хламидийным уретритом. У всех больных хроническим уретритом, независимо от вида лечения, после назначенной терапии максимально снизилось количество СD20+-лимфоцитов (р<0,05). 
Изучение влияния ронколейкина и беталейкина выявило тенденцию к достоверному уменьшению количества СD20+ -лимфоцитов в эякуляте у больных хроническим хламидийным простатитом в экспериментальных группах при сравнении с контролем. Проведение курса лечения с использованием имунофана, ронколейкина или беталейкина способствует достоверному увеличению уровня СD25+-лимфоцитов в эякуляте только у больных хроническим хламидийным простатитом. Использование имунофана, ронколейкина или беталейкина при урогенитальных инфекциях приводит к достоверному уменьшению числа клеток в эякуляте, несущих рецепторы к СD95+-лимфоцитам у больных хроническим уретритом всех групп. Далее анализировались результаты определения содержания комплемента и цитокинов в эякуляте у больных до и после лечения. Здесь после разных видов терапии мы наблюдали достоверное увеличение уровня С3 компонента комплемента, у всех больных группы контроля и леченных ронколейкином и беталейкином. Количество С4 компонента комплемента, по сравнению с динамикой у группы пациентов, получавших имунофан, достоверно снижалось только у больных хроническим хламидийным простатитом в лечении которых использовали ронколейкин или беталейкин.
По результатам наблюдения нами также отмечалась, правда не всегда достоверная, тенденция к увеличению С1-инг компонента комплемента после всех видов проведенной терапии. При анализе результатов обследования пациентов до лечения было выявлено, что из изучаемых медиаторов воспаления в эякуляте недостоверно уменьшилось содержание ИЛ-8 и ФНО-a, которые, по-видимому, являются маркерами местного воспалительного ответа. Концентрация же ИЛ-la и ИЛ-1b, напротив, недостоверно увеличилась. Достоверными были лишь изменения анализируемых здесь показателей между группами контроля и леченных цитокинами. У мужчин с воспалением гениталий в процессе терапии беталейкином  заметно возрастал уровень ИЛ-1a и ИЛ-1b и к концу лечения (р<0,05). У больных, получавших терапию имунофаном, динамика была менее выраженной, и нормализация уровня ИЛ-la и ИЛ-1b в эякуляте заметно запаздывала. Применение ронколейкина и беталейкина позволило снизить уровень ФНО-a в эякуляте у больных хроническим хламидийным уретритом и простатитом (р<0,05). Дальнейший сравнительный анализ показал, что уровни IgA, IgG и sIgA в эякуляте у больных хроническим хламидийным уретритом и простатитом после терапии ронколейкином и беталейкином также снизились. Необходимо отметить также и то, что в группе пациентов, получавших терапию ронколейкином и беталейкином, имелась достоверно значимая тенденция к снижению IgM в эякуляте больных хроническими хламидийными уретритами. 
Исследования динамики иммунного ответа репродуктивного тракта обследуемых по результатам исследования периферической крови показали, что при хроническом хламидийном простатите исходный уровень лимфоцитов в периферической крови был ниже показателей в группе больных уретритом. В группе леченных беталейкином у всех респондентов мы наблюдаем и достоверное улучшение исследуемых показателей после лечения (р<0,05), и достоверно различаемую разницу эффективности лечения по средним величинам разницы показателей до и после терапии как имунофаном (р<0,05), так и ронколейкином (р<0,05). После применения ронколейкина и беталейкина в периферической крови пациентов достоверно возрастало количество СD3+-клеток, оставаясь, однако ниже нормы. Содержание СD3+-лимфоцитов у пациентов после применения ронколейкина и беталейкина выросло, в среднем, при хроническом хламидийном уретрите в 1,15 раза, простатите – в 1,25. Динамика CD4+- лимфоцитов у представителей экспериментальной группы после лечения составила со знаком плюс при хроническом хламидийном уретрите 1,2 раза, простатите – 1,5 раза. В группе больных получавших терапию цитокинами определялось относительно контроля достоверно большее число CD3+ и CD4+ лимфоцитов (р<0,05).  Регулирующее влияние цитокинов в равной степени затрагивало как CD4+, так и CD8+. Об этом свидетельствует отсутствие после лечения цитокинами отклонений соотношения (CD4/CD8) от нормальных величин. Однако, достоверного влияния цитокиновой терапии на количество и динамику СD8+-лимфоцитов в периферической крови у больных, леченных ронколейкином и беталейкином после терапии беталейкином, нами не выявлено. Дисфункции гуморального звена иммунитета также имели место у больных с воспалительными заболеваниями половой системы (табл. 2). Колебания уровней IgA, IgG и IgM у пациентов, получавших терапию имунофаном и цитокинами, была в общем схожей, но в ходе исследования нами все же были выявлены и различия.
Нами также проводилось изучение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). Так, если показатели ЦИК в группе леченных имунофаном уменьшились в среднем на 10%, то в группе леченных ронколейкином, данные уменьшения увеличивались в среднем до 40%, а в группе леченных беталейкином – до 45%. Отмечено достоверное снижение С3 компонента комплемента у всех респондентов трех групп наблюдения. Терапия цитокинами также способствует нормализации уровня С1-инг компонента комплемента. Динамика показателей крови вскрыла, что до начала лечения был снижен уровень ИЛ-la и ИЛ-1b у больных простатитами. Это также послужило одним из оснований для назначения обследуемым пациентам цитокинов. После лечения беталейкином содержание ИЛ-1a у всех респондентов не отличалось от показателей у здоровых доноров. У пациентов, получавших имунофан и ронколейкин, достоверно после лечения не происходило увеличения интерлейкинов в периферической крови. Различия в содержании ИЛ-la в периферической крови леченных цитокинами (дельта) были достоверными относительно контрольных значений. Леченные беталейкином имели абсолютную достоверную разницу в значениях после лечения (дельта) относительно леченных ронколейкином и имунофаном по показателям ИЛ-la и ИЛ-1b.


Таблица 2. Содержание иммуноглобулинов и ЦИК в периферической крови у больных хроническим хламидийным уретритом и хроническим хламидийным простатитом до и после лечения (М±m)

Терапия с использованием беталейкина также достоверно снижала уровни ИЛ-8 и ФНО-ф в периферической крови по сравнению с результатами лечения имунофаном и ронколейкином.

ВЫВОДЫ

1. Картина хронических воспалительных заболеваний урогенитального тракта мужчин на примере уретритов и простатитов наиболее достоверно раскрывается при исследовании эякулята, где из гуморальных факторов в эякуляте обнаруживается не только лизоцим, иммуноглобулины, медиаторы воспаления, но и компоненты комплемента, цитокины. Все перечисленные факторы являются не столько элементами «первой» линии защиты репродуктивного тракта, сколько принимают участие в межклеточном взаимодействии и в локальном иммунном ответе.
2. После лечения беталейкином или ронколейкином у больных с воспалительными заболеваниями половой системы в эякуляте относительно контроля (группы леченных имунофаном) существеннее снижалось общее количество, число жизнеспособных лейкоцитов и относительное содержание мононуклеаров, лизосомальная активность, спонтанная и индуцированная НСТ-редуцирующая активность нейтрофилов, ярче нарастал функциональный резерв этих клеток, увеличивалась активность и интенсивность фагоцитоза, снижалось количество нейтрофилов, адгезированных на сперматозоидах, число лимфоцитов, несущих CD маркеры, увеличивалась концентрация С3 и С1-инг компонентов комплемента  при  снижении С4,  нарастал  уровень ИЛ-1a и ИЛ-1b, при снижении концен¬трации ИЛ-8 и ФНО-a, уменьшался общий белок, отмечалась тенденция к снижению иммуноглобулинов (Ig): IgA, IgM, IgG и лизоцима, увеличению sIgA.
3. У пациентов, леченных цитокинами, относительно контрольных значений регистрируются более значимые изменения, которые заключались в снижении общего количества лейкоцитов, числа жизнеспособных лейкоцитов и мононуклеаров в эякуляте, увеличении доли нейтрофилов, снижении активности лизосом нейтрофилов, возрастании функционального резерва нейтрофилов, увеличении активности и интенсивности фагоцитоза нейтрофилов эякулята, снижении уровня IgA, IgG и лизоцима в эякуляте.
4. Беталейкин способствовал более яркому и достоверно значимому, относительно динамики группы контроля и группы, леченных ронколейкином, нарастанию количества лейкоцитов и лимфоцитов, снижению абсолютного и относительного количества моноцитов, нейтрофилов, увеличению активности, интенсивности фагоцитоза и функционального резерва нейтрофилов, роста относительного содержания Т-лимфоцитов периферической крови, экспрессирующих поверхностные маркеры CD3+, CD4+, CD16+.
5. Применение рекомбинантных ИЛ-1 и ИЛ-2 относительно имунофана намного ярче и эффективнее усиливает защитные реакции в очаге поражения за счет активации функций нейтрофильных гранулоцитов и усиления синтеза провоспалительных цитокинов клетками воспалительного очага. Наиболее яркий и достоверный эффект применения цитокинов манифестирует беталейкин, в связи с чем, использование ИЛ-1 максимально повышает эффективность лечения цитокинами от хронической хламидийной инфекции.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Использовать ронколейкин и беталейкин для лечения пациентов с воспалительными заболеваниями половой системы в сочетании с антибактериальной терапией. Беталейкин вводить в виде 5 подкожных инъекций в дозе 5 нг/кг массы тела на 1,0 мл изотонического раствора с интервалом 2 дня. Препарат начинать использовать одновременно с антибиотикотерапией. Ронколейкин использовать в виде подкожных введений 0,5 мг через день в сочетании с этиотропной терапией. Назначать больным 5 инъекций через день. Критериями эффективности терапии считать: клиническое выздоровление больных, нормализацию клинических анализов и элиминацию возбудителей из по¬ловых путей.
2. Зная, что эндогенные ИЛ-1 и ИЛ-2 продуцируются клетками в нормальных условиях в минимальном количестве, где их синтез усиливается в ответ на антигены или индукторы, помнить, что наиболее достоверный эффект применения цитокинов при лечении мужчин с хронической хламидийной инфекцией манифестирует беталейкин.

Список работ, опубликованных по теме  диссертации

1. Использование цитокинов в венерологии // Актуальные вопросы инфекций, передаваемых половым путем, у детей, подростков и беременных женщин: Тез. Всероссийской науч.-практ. конференции дерматовенерологов. - Екатеринбург, 1999. - С. 60 (в соавт. Долгушин И.И., Ковалев Ю.Н., Зиганшин О.Р.).
2. Изучение местного иммунитета у больных с хроническими уретритами до и после лечения // Современные лабораторные технологии в биологии и медицине: Тез. докл. конф.- Челябинск, 2000.- С. 32 (в соавт. Зиганшин О.Р., Тынтеров А.И.).
3. Методы изучения местного иммунитета репродуктивного тракта мужчин: Метод. рекомендации.- Челябинск, 2000.- 20с. (в соавт. Долгушин И.И., Зиганшин О.Р., Телешева Л.Ф., Ковалев Ю.Н., Сагалов А.В., Захарова М.А., Тынтеров А.И.)
4. Показатели местного иммунитета эякулята у больных хроническим простатитом и их диагностическое значение // Актуальные проблемы медицинской науки и профессионального образования: Тр. науч. сессии.- Челябинск, 2000.- С. 140-142 (в соавт. Ковалев Ю.Н., Зиганшин О.Р.).
5. Применение ронколейкина в терапии хламидийной и уреаплазменной инфекций // Хламидийная и вирусная инфекции, перспективы лечения в ХХI веке: Сибирская науч.- практ. конференции: Тез. докл.- Новосибирск, 2000.- С. 122 (в соавт. Ковалев Ю.Н., Зиганшин О.Р.).
6. Современные концепции иммунопатогенеза хронического простатита // Безопасность жизнедеятельности на пороге третьего тысячелетия: Тез. докл. науч.-практ. Конференции. - Челябинск, 2000.- С. 60 (в соавт. Зиганшин О.Р., Тынтеров А.И.).
7. Состояние нейтрофилов эякулята у мужчин страдающих хроническим простатитом: В журн. «Иммунология». - 2000. - №3. – С.54-56 (в соавт. Зиганшин О.Р., Долгушин И.И.).
8. Изучение субпопуляционного состава лимфоцитов эякулята у мужчин с хроническими простатитами и у здоровых доноров // Болезни кожи, инфекции, передаваемые половым путем: Сб. науч. трудов, посвящ. 80-летию кафедры дерматовенерологии Иркутского мед. университета.- Иркутск, 2001.- С. 259 (в соавт. Ковалев Ю.Н., Зиганшин О.Р.).
9. Использование иммуноцитокинотерапии в лечении хронического простатита // Рос. журн. венерологии и дерматологии.- 2001.- №1.- С. 60-63 (в соавт. Ковалев Ю.Н., Долгушин И.И., Ярушина Р.М., Тынтеров А.И., Зиганшин О.Р.).
10. Обоснование необходимости использования цитокинов в венерологии // Болезни кожи, инфекции, передаваемые половым путем: Сб. науч. тр. посвящ. 80-летию каф. дерматовенерологии Иркутского мед. университета.- Иркутск, 2001. С. 261 (в соавт. Тынтеров А.И., Зиганшин О.Р.).
11. Опыт применения ронколейкина в терапии хронических простатитов // Хронические дерматозы: новые аспекты патогенеза и терапии. Инфекции, передаваемые половым путем: Конф., посвящ. 90 летию кафедры кож. вен. болезней леч. факультета Рос. госуд. мед. университета: Тез. докл.- М., 2001.- С. 76 (в соавт. Тынтеров А.И., Зиганшин О.Р.).
12. Диагностика и современные методы исследования иммунного ответа репродуктивного такта мужчин: Метод. рекомендации. – Челябинск: ЧГМА, 2002. – 32 с. (с соавт. Елисеев Е.В., Нагаева В.В.).
13.  Физиология воспалительного процесса урогенитального тракта мужчин в локальных механизмах естественной резистентности: Уч. пособие / Под общей ред. Заслуж. врача РФ, профессора, д.м.н. Соловьева В.С. – Тюмень: ТюмГУ, 2003. – 106 с. (с соавт. Елисеев Е.В., Нагаева В.В., Трегубова М.В.).
14. Клиническое применение ронколейкина и беталейкина в сочетании с антибактериальной терапией для лечения мужчин с воспалительными заболеваниями половой системы: Метод. рекомендации. – Челябинск: УГМАДО, 2004. – 52 с. (с соавт. Елисеев Е.В., Трегубова М.В., Нагаева В.В.).
15. Физиологические механизмы иммунологической реактивности урогенитального тракта мужчин при иммунокоррегирующей и цитокиновой терапии: Уч. пособие / Под общей ред. Заслуж. врача РФ, профессора, д.м.н. Соловьева В.С. – Тюмень: ТюмГУ, 2005. – 192 с. (с соавт. Елисеев Е.В., Трегубова М.В.).
16. Локальная иммунорегуляция урогенитального тракта мужчин: структура, оценка, механизмы / Под общей ред. Заслуж. врача России, профессора, д.м.н. Соловьева В.С. – Тюмень: Изд-во «Экодом», 2006. – 224 с. – (Серия: «Репродуктивное здоровье мужчины»). (с соавт. Елисеев Е.В., Трегубова М.В.).
17. Локальная иммунорегуляция урогенитального тракта мужчин при лечении имунофаном и цитокинами / Вестник Южно-Уральского государственного университета / Серия: Образование, здравоохранение, физическая культура, №3 (59), выпуск 8, том 1, 2007 – 0,5 п.л. (принято к печати, сентябрь 2007 г.)  (с соавт.: Елисеев Е.В., Зиганшин О.Р.).